Techniques de sterilisation

A/ Stérilisation par la chaleur :

I / Chaleur sèche ( oxydation des protéines ):

o chauffage direct :

-
Effectuer trois ou quatre passages lents des objets à stériliser dans
la flamme bleue du bec Bunsen afin de détruire à sa surface toute
matière organique
- A utiliser pour les objets en verre ( pipettes,
baguettes de verre...), pour certains objets en métal (anse , pince), ne
convient pas pour le plastique, les objets tranchants, les instruments
de chirurgie délicats ...

o stérilisateurs à air chaud ( fours Pasteur, Poupinel, de type Jouan ) :

- Emballer le matériel dans du papier aluminium, les récipients et tubes à col doivent être bouchés avec du coton cardé
-
Les spores et germes sont détruits en chaleur sèche, par un chauffage
de : 4 heures à 140 °C ; 2 heures 30 à 160°C ; 30 min à 180°C
- A
utiliser pour la verrerie, porcelaine et instruments métalliques (
indispensable pour les parties des objets qui ne peuvent pas être
atteintes par la flamme )
- Ne convient pas pour les objets en matière plastique ou caoutchouc ou objets délicats.

II / Chaleur humide ( dénaturation des protéines ) :

o autoclavage ( méthode de stérilisation la plus efficace )

-
Dans une atmosphère de vapeur d'eau exempte d'air, toutes les bactéries
y compris les spores sont tuées en 20 min à 121°C. Pour un volume
donné, la température est fonction de la pression ; on obtient la
température requise de 120°C, très supérieure à la température normale
d'ébullition de l'eau, en chauffant en surpression, c'est à dire en vase
clos. L'appareil utilisé est l'autoclave.
- La préparation du
matériel se fait selon l'indication du fournisseur de l'autoclave, à
savoir de façon générale que la verrerie sera bouchée au coton et
recouvert de papier aluminium, les récipients contenant un milieu de
culture seront remplis aux 3/4, les instruments métalliques sont déposés
sur un plateau de boites spéciales contenant une solution de carbonate
de soude à 2% contre la rouille ...
- Ne convient pas pour les produits liquides délicats ( milieux albumineux, lait, gélatine ... )
-
A utiliser pour les milieux de culture, matériel en caoutchouc, la
verrerie, les instruments de prélèvement et la stérilisation du matériel
après son utilisation.

o ébullition

- Un chauffage de 30
minutes à 100°C par ébullition ou un maintien dans la vapeur d'eau
bouillante suffit à détruire toutes les formes végétatives. Dans ces
conditions les spores ne sont pas détruites : on peut améliorer à ce
moment là l'efficacité de l'ébullition en ajoutant à l'eau des solutions
salines concentrées ( augmentation du point d'ébullition ) ou en
prolongeant le chauffage.
- A utiliser pour la stérilisation des
produits liquides délicats : milieux albumineux, lait, gélatine,
solutions concentrées de glucides, ...

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